课程简介：本课程是蛋白质与酶工程领域的核心实践环节，聚焦现代酶工程的关键技术—蛋白质定向进化。课程以“草甘膦氧化酶”为模式蛋白，系统性地开展从突变体文库构建、高通量筛选到蛋白纯化与功能鉴定的完整实验流程。学生将深入学习并掌握易错PCR、噬菌体快速筛选技术、亲和层析及酶活测定等核心技术原理与操作。通过本课程，旨在加深学生对蛋白质理性设计与改造的感性认识，培养学生严谨的科学思维、规范的实验操作技能以及独立分析与解决问题的能力，为从事酶分子设计、改造及应用研究奠定坚实的实践基础。
实验内容：围绕蛋白质定向进化的完整技术链条设计，共分为三个核心模块：1）突变体文库构建与筛选：利用易错PCR技术构建草甘膦氧化酶的随机突变体文库，并通过噬菌体展示技术进行高通量活性筛选，以获得潜在的高活性突变体。2）重组蛋白纯化：采用亲和层析技术（如镍柱纯化）从工程菌中分离纯化筛选得到的目标突变体蛋白。3）酶学性质分析：运用鲁米诺化学发光法测定纯化后突变体酶的催化活性，评估其与野生型酶相比的活性变化，完成从“设计-筛选-纯化-验证”的全过程实践。
实验教师：蔡敏珉
